Диагностика подтекания околоплодных вод

http://www.cironline.ru/articles/newarticles/219/

Диагностика подтекания околоплодных водИ. И. Гузов, к. м. н.Что такое преждевременное излитие вод Околоплодные воды являются той средой, в которой живет и развивается внутриутробный плод. Околоплодные воды находятся в замкнутом пространстве (оболочках плода). Оболочки плода состоят из двух листков:

амниона - внутреннего, нежного, легко растяжимого и хориона - наружного, прочного, неподатливого, обеспечивающего достаточную жесткость оболочкам.

Поскольку околоплодные воды находятся внутри амниона, то они называются также амниотической жидкостью. Амниотическая жидкость и околоплодные воды — полные синонимы. Плацента и оболочки плода являются барьером, который обычно совершенно не проницаем для бактериальной (гнойной) инфекции. В течение всей беременности плод развивается в стерильной среде. Залогом этой стерильности, а следовательно и благополучия внутриутробного плода является целостность околоплодных оболочек (синоним: плодного пузыря). Поэтому нарушение целостности плодного пузыря является серьезным состоянием, чреватым развитием целого ряда осложнений со стороны матери и плода.

Воспалительные заболевания (инфекции) на уровне влагалища и шейки матки — кольпит и эндоцервицит — являются самой частой причиной нарушения целостности плодного пузыря. Местные воспалительные процессы запускают активацию ферментов, в частности, металлопротеиназ, которые начинают растворять соединительнотканный каркас хориона и делать плодный пузырь истонченным, податливым и легко рвущимся даже при небольшом повышении тонуса матки. Одновременно местные воспалительные процессы запускают каскады биохимических реакций, приводящих к образованию простагландинов — самых мощных стимуляторов сократимости матки, способных запустить в роды матку на любом сроке беременности, даже в первом триместре. Простагладнины и металлопротеиназы ослабляют также соединительную ткань шейки матки, делая шейку мягой и податливой. В случае разрыва околоплодных оболочек активация простагландинов резко усиливается, что может приводить к немедленному запуску родовой деятельности. Это явление часто используется в акушерстве, когда в родах плодный пузырь искусственно вскрывают (амниотомия) для усиления и ускорения родов.

Сразу после излития околоплодных вод начинается поступление бактерий из влагалища и шейки матки в полость матки, что приводит к инфицированию плода и полости матки. Если не принять своевременных мер, плод может погибнуть от внутриутробной инфекции, а у матери могут развиться тяжелые гнойные осложнения (сепсис, антонов огонь).

Уменьшение объема полости матки в результате излития вод может приводить к смещению стенки матки относительно плаценты, т. е. к отслойке плаценты и риску острой гипоксии плода и кровотечения.

Преждевременное излитие околоплодных вод является главной непосредственной причиной недоношенности. Недоношенность — состояние, касающееся всего лишь 10% новорожденных — дает 90% неонатальной заболеваемости и смертности.

Особенно коварны так называемые субклинические формы разрыва плодного пузыря, когда массивного отделения вод не происходит, и они потихоньку сочатся, смешиваясь с влагалищным секретом. И врач, и пациентка могут не заметить этого, а плоду может угрожать серьезная опасность, поскольку он не защищен от внутриутробной инфекции. Если подтекание околоплодных вод происходит более 32 часов, и не назначаются большие дозы антибиотиков, внутриутробная инфекция у плода развивается в 100% случаев. Если же своевременно назначить антибиотики, то в некоторых случаях можно выиграть время, назначив токолитики (вещества, блокирующие родовую деятельность) и кортикостероиды (гормоны коры надпочечников, ускоряющие созревание легких плода). В этом случае плод может развить адаптивные механизмы, необходимые для самостоятельно дыхания, поддерживая свою жизнедеятельность за счет плаценты.

Возможна и другая ситуация, когда беременная женщина считает более обильные физиологические бели за подтекание околоплодных вод. Отсутствие точной и надежной диагностики подтекания вод в этом случае может привести к лишнему стрессу, ненужным, а порой и небезопасным медицинским назначениям.

Кроме инфекций, важными причинами преждевременного излития вод являются несостоятельность шейки матки (истмико-цервикальная недостаточность), аномалии развития матки (однорогая, двурогая матка), миома матки.

Медицинские термины

Физиологически разрыв плодных оболочек наступает в конце первого периода родов, при открытии шейки матки больше чем на 4-5 см. Если не трогать плодный пузырь, то в половине случаев воды изливаются при полном раскрытии плодного пузыря. Если околоплодные воды отходят до достаточного раскрытия шейки матки, говорят о преждевременном излитии околоплодных вод, а если это происходит до родов — о дородовом излитии околоплодных вод. Таким образом, все частные случаи излития околоплодных вод до достаточного раскрытия шейки матки относятся к более общей категории преждевременного излития околоплодных вод.

Синонимом традиционного для русского акушерства термина преждевременного излития околоплодных вод является пришедший из англоамериканской литературы преждевременный разрыв плодного пузыря. Особым случаем преждевременного излития околоплодных вод является преждевременное излитие околоплодных вод при недоношенной беременности (синоним: разрыв плодных оболочек при недоношенной беременности), т. е. происходящее при сроке беременности до 38 недель.

В данной статье будут использоваться следующие термины:

Разрыв плодных оболочек (РПО). Относится ко всем случаям (в том числе и к физиологическим) излития околоплодных вод. Английский термин: ROM (Rupture Of [the fetal] Membranes); Преждевременный разрыв оболочек (ПРО). Относится ко всем случаям преждевременного излития околоплодных вод. Английский термин: PROM (Premature Rupture Of [the fetal] membranes); Преждевременный разрыв оболочек при недоношенной беременности (ПРО-НБ). Относится ко всем случаям ПРО до срока беременности 38 недель. Английский термин: PPROM (Pre-term Premature Rupture Of [the fetal] Membranes); Тест AmniSure в клиническоей практике

С мая 2006 г. в акушерско-гинекологической клинике Центр иммунологии и репродукции можно пройти обследование на выявление подтекания околоплодных вод с помощью американской тест-системы AmniSure, описанию которой посвящен следующий раздел данной статьи.

Тест AmniSure является быстрым неинвазивным качественным тестом, используемым для выявления во влагалище беременных женщин примеси околоплодных вод (амниотической жидкости). Исследование проводится в случае наличия симптомов или подозрения на подтекание околоплодных вод. Разрыв плодного пузыря в сроки до 37 недель беременности осложняет около 12% всех беременностей.

Данное исследование является высокоспецифичным, поскольку используется определение плацентарного α1микроглобулина (PAMG-1, placental α-1 microglobulin), белка содержащегося в околоплодных водах. Плацентарный микроглобулин был выбран в качестве маркера разрыва оболочек благодаря своим уникальным характеристикам: высокой концентрации в околоплодных водах, низкому уровню в крови и исключительно низкому уровню в секрете влагалища и шейки матки при целых околоплодных оболочках.

Для проведения пробы не требуется использование зеркала. Образец влагалищного секрета получают с помощью тампона, который помещают в пробирку с растворителем. Растворитель экстрагирует содержимое секрета в течение одной минуты, после чего тампон можно утилизировать. Затем тестовая полоска AmniSure помещается в пробирку. Растворитель, содержащий антитела к ПАМГ-1 дифундирует в тестовую область полоски. В случае наличия PAMG-1 в пробе, он свяжется с антителами в тестовой зоне, образуя вторую полоску окрашивания. Результаты теста считываются через 5-10 минут после начала реакции. Одна (контрольная) полоска окрашивания указывает на то, что разрыва оболочек нет. Две полоски указывают на разрыв оболочек.

Данный тест использует принцип иммунохроматографии и одобрен для применения в США (FDA update от 19 июля 2004 г.). FDA (Foods and Drugs Administration) относит данный тест к тестам умеренной сложности. Тест должен выполняться врачами, акушерками или медсестрами.

КРАТКАЯ ИНФОРМАЦИЯ И ОБЪЯСНЕНИЕ ТЕСТА

Преждевременный разрыв плодных оболочек (ПРО) возникает примерно в 10% беременностей. В настоящее время ПРО является одной из самых серьезных проблем в акушерской практике.1 ПРО является самой частой причиной преждевременных родов и осложнений у новорожденных, требующих госпитализации в отделение интенсивной терапии новорожденных. Ведение пациенток с ПРО и ПРО-НБ является дорогостоящим и требующим принятия серьезных решений, поскольку врач оценивает как вероятность пролонгации беременности, так и сопряженный с этим риск инфекции.1 ПРО может иметь крайне серьезные последствия для новорожденного, такие как преждевременные роды,2 дистресс-синдром, выпадение пуповины, отслойка плаценты и инфекция.3 ПРО-НБ составляет от 20% до 40% случаев ПРО, и риск его удваивается при многоплодной беременности и аномалиях развития матки. ПРО является причиной 20%-50% всех случаев преждевременных родов, материнской и перинатальной смертности, гипоплазии легких плода, выпадения пуповины, деформаций плода, послеродового эндометрита. Все эти осложнения значительно повышают заболеваемость и смертность матери и плода.4 Продолжительность латентного периода ПРО обратно пропорциональна сроку беременности, а риски тяжелых последствий для матери и плода будут тем выше, чем дольше этот промежуток. Поэтому в основную группу риска попадают глубоко недоношенные дети и их матери. Поскольку ПРО связан с 20 - 50% всех преждевременных родов, он также является важным фактором проблем у новорожденных, связанных с недоношенностью.5

Несвоевременная диагностика ПРО может приводить к опозданию с назначением жизненно важных акушерских мер (например, сепсис новорожденных возникает, если диагноз ПРО ставится более чем через 32 часа после возникновения). И наоборот, ложный диагноз ПРО может приводить к ненужным вмешательствам (например, госпитализации или родовозбуждению). Поэтому точный и своевременный диагноз этих нарушений имеет важнейшее значение для клинициста.6 Однако точный диагноз излития вод остается частой проблемой в акушерстве.7Своевременность диагноза также имеет огромное значение, поскольку преждевременное излитие вод связано с серьезными последствиями для плода и новорожденного. К сожалению, до сегодняшнего дня нет "золотого стандарта" диагностики излития вод в клинической практике. Большинство существующих тестов очень неточны и в некоторой степени инвазивны. Преобладающие в современной практике нитразиновый тест и проба кристаллизации высоко ненадежны, становясь все более неточными, если после разрыва оболочек прошло более одного часа. Через сутки после разрыва оболочек они становятся вообще неинформативными. Было доказано, что в случаях продолжительного подтекания вод эти тесты дают не больше информации, чем обычное акушерское исследование.8

AmniSure решает все эти проблемы. Это быстрый стрип-тест, который может диагностировать подтекание околоплодных вод, обеспечивая высокоточный и своевременный диагноз ПРО. Следовательно, могут быть предприняты своевременные меры для предотвращения осложнений (профилактическое назначение антибиотиков, токолитиков или кортикостероидов, родовозбуждение и т. д.).

ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТА

Набор AmniSure является самодостаточной тестовой системой, обеспечивающей качественные результаты, превосходящие по скорости, точности, чувствительности, специфичности и надежности все существующие методы. Тест AmniSure покрывает весь спектр диагностических потребностей, от простых случаев, когда просто нужно подтверждающее исследование, до самых сложных случаев, когда никакого видимого подтекания околоплодных вод нет (так называемые субклинические разрывы). Проведение теста не требует введения зеркала, практики, широко использующейся в настоящее время для диагностики разрыва оболочек.

ПРИНЦИП ТЕСТА

Проба выделений из влагалища, взятая влагалищным тампоном, помещается в пробирку с растворителем. Растворитель в течение 1 минуты экстрагирует пробу из тампона, после чего тампон выбрасывается. После этого в пробирку погружается тестовая полоска AmniSure (дипстик, устройство бокового тока). Содержимое пробы перемещается из погружающейся области в тестовую область полоски. Результат теста визуально считывается через 5-10 минут по наличию одной или двух полос.

Тест использует принцип иммунохроматографии для определения для определения человеческого плацентарного α1-микроглобулина (ПАМГ-1, PAMG-1, placental α1-microglobulin). ПАМГ-1 был выбран с этой целью благодаря своим уникальным характеристикам: высокому содержанию в околоплодных водах, низкому уровню в крови и чрезвычайно низкой (50-220 пг/мл) концентрации в секрете влагалища и шейки матки при неповрежденных оболочках.

Тест использует высокочувствительные моноклональные антитела, которые выявляют даже минимальное количество белка, появляющегося во влагалище после начала подтекания вод. Для минимизации частоты ложноотрицательных результатов, в тесте используется специально подобранная комбинация из двух моноклональных антител, которая обеспечивает порог чувствительности теста на оптимально низком уровне. Фоновый уровень ПАМГ-1 в секрете влагалища чрезвычайно низок (0,05 - 0,005 мг в капле). Пороговая концентрация ПАМГ-1, которую можно определять с помощью данной комбинации антител, составляет 50 - 220 пг (т. е. 0,05 - 0,22 нг) в 1 мл секрета влагалища. Порог чувствительности теста был специально повышен в 20 раз до 5 - 7 нг/мл, что позволило повысить точность теста до 99% за счет устранения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Во время процедуры ПАМГ-1 из пробы последовательно связывается с моноклональными антителами A (A-Mab), конъюгированными с меткой, а затем с моноклональными антителами B (B-Mab), иммобилизованными на нерастворимом носителе. Когда антитела A-Mab входят в контакт с ПАМГ-1 в зоне погружения, они захватывают ПАМГ-1 и транспортируют его в тестовую зону. Тестовая зона дипстика имеет полосу, где находятся иммобилизованные антитела B-Mab. Антитела B-Mab “встречают” ПАМГ-1, приносимый мобильными антителами A-Mab из зоны погружения. Эта встреча иммобилизует комплекс ПАМГ-1/A-Mab, в результате чего появляется буро-желтое окрашивание в области тестовой полоски. Это окрашивание возникает в результате наличия золотого красителя, прицепленного к антителам A-Mab. Наличие такого окрашивания указывает на подтекание околоплодных вод. Вторая (контрольная) полоска сделана для того, чтобы проверить, “работает” ли тест-система правильно. Эта полоска появляется когда иммуноглобулины G кролика против антигенов мыши соединятся с мышиными антителами с золотым красителем. Если реакция происходит, появляется контрольная полоска.

РЕАГЕНТЫ И КОМПОНЕНТЫ

Состав набора:

Инструкция. Тестовая полоска AmniSure (устройство бокового тока, “дипстик”) в пакете из фольги с поглотителем влаги. Каждая тестовая полоска содержит: а) моноклональные антитела A, вырабатываемые мышиной гибридомой; б) иммобилизованные моноклональные антитела B, вырабатываемые другой мышиной гибридомой; в) коллоидные золотые частицы, связанные с моноклональными антителами A; г) меченные мышиные IgG; д) IgG кролика против антител мыши. Стерильный влагалищный полиэстеровый тампон. Пластиковая пробирка с водным растворителем. Раствор содержит: а) 0,9% NaCl; б) 0,1% Triton X100; в) 0,01% NaN3. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ Тестовый набор AmniSure предназначен только для диагностики in vitro. Никакие компоненты не должны приниматься внутрь. Прочтите и точно следуйте инструкции. Несоблюдение этого может приводить к неточным результатам. При заборе биоматериала, работе с тестом и работе с отходами должны соблюдаться меры предосторожности. Поврежденные компоненты теста не должны использоваться. Использованные тесты представляют биологическую опасность. Предпринимайте необходимые меры предосторожности при работе с использованными тестами. Не используйте тесты после даты, указанной на упаковке набора и на коробке. Не используйте компоненты теста повторно. Не сгибайте и не сминайте тестовую полоску (дипстик) или упаковку из алюминиевой фольги, в которой находится тестовая полоска. ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ Храните набор в сухом месте при температуре 4 - 20°С. НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ! При хранении внутри упаковки из фольги при указанной температуре тест остается стабильным до истечения срока, указанного на упаковке. Тест AmniSure должен быть использован в течение 6 часов после вскрытия упаковки из фольги. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Возьмите пробирку с растворителем за крышечку и хорошо встряхните, убедившись, что вся жидкость внутри пробирки опустилась на дно. Откройте пробирку и поставьте в штатив в вертикальном положении. Для сбора пробы с поверхности влагалища возьмите стерильный полиэстеровый тампон, входящий в состав набора. Выньте стерильный тампон из упаковки, согласно инструкции на упаковке. До введения во влагалище кончик тампона не должен ни с чем соприкасаться. Возьмите тампон за середину ручки и осторожно введите полиэстеровый кончик тампона во влагалище на глубину не более 5 - 7 см.Оставьте тампон во влагалище на 1 минуту, и только после этого выньте его. Погрузите полиэстеровый конец тампона в пробирку и промойте тампон в растворе, вращая тампон в течение 1 минуты. Выньте тампон и поместите его в дезинфицирующий раствор для обработки биологических отходов. Вскройте пакет из фольги в местах надреза и выньте тестовую полоску AmniSure. Погрузите белый конец тестовой полоски (обозначенный стрелками) в пробирку с растворителем и оставьте его не менее чем на 5 и не более чем на 10 минут. Массивное вытекание околоплодных вод сделает результат видимым рано (после 5 мин), а небольшое подтекание станет видимым только через 10 минут. Выньте тестовую полоску из пробирки, если проявились обе полоски (но не ранее 5 минут) или ровно через 10 минут после погружения. Прочтите результаты, положив тестовую полоску на чистую сухую и плоскую поверхность. Не считывайте результаты, если истекло более 15 минут после погружения тестовой полоски в пробирку. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

** Степень окрашивания полосок может варьировать. Тест нормально работает даже в случае, если полоски бледные или неодинаково окрашенные. Не пытайтесь интерпретировать тест, основываясь на степени окрашивания полосок.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Каждый тест AmniSure имеет набор встроенных реагентов и процедурных контролей, необходимых для правильной работы. Появление одной или двух полосок в тестовой зоне свидетельствует о рабочем состоянии теста. Если видна только одна контрольная полоска, результат теста отрицательный. Если видны обе полоски (контрольная и тестовая), результат положительный. Если нет ни одной полоски, тест негоден.

ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА Набор AmniSure предназначен для in vitro диагностки белка околоплодных вод человека ПАМГ-1 в секрете влагалища беременных женщин. Тест должен использоваться для обследования женщин с подозрением на подтекание околоплодных вод или клиническими симптомами состояний, сопровождающихся подтеканием вод. Для правильности работы тест-системы следует неукоснительно соблюдать все положения данной инструкции. Каждый тест является набором одноразового использования и не должен использоваться повторно. Результаты данного теста являются качественными. Он не должен использоваться для количественной интерпретации результатов. При наличии обильных кровянистых выделений (полиэстеровый конец тампона красный) тест может работать неправильно, и использование его в таких случаях не рекомендуется. Если имеются только следовые количества крови (тампон розоватый), тест нормально функционирует. В крайне редких случаях, когда проба взята через 12 и более часов после разрыва, могут быть ложноотрицательные результаты. Тест должен использоваться не ранее 6 часов после удаления из влагалища любых дезинфицирующих растворов или лекарственных препаратов. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

Подтекание околоплодных вод однозначно указывает на разрыв оболочек плодного яйца у всех женщин. Исследования плацентарного α1-микроглобулина установили, что он является маркером околоплодных вод.9,10 Были измерены концентрации ПАМГ-1 в секрете шейки матки и влагалища у женщин с неосложненным течением беременности. Они колебались между 0,05 и 0,22 нг/мл. В условиях кольпита или незначительной примеси сыворотки крови фоновый уровень ПАМГ-1 может достигать не более 3 нг/мл. Концентрация ПАМГ-1 в околоплодных водах составляет 2000 - 25000 нг/мл. Клинически значимое подтекание околоплодных вод повышает концентрацию ПАМГ-1 во влагалище в тысячи раз. Порог чувствительности теста AmniSure установлен в 20 раз выше базальных концентраций ПАМГ-1 во влагалище (5 нг/мл ПАМГ-1). Это устранило влияние колебаний базальных значений ПАМГ-1 на результаты теста теста во всех исследованных группах населения.

РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Работа теста AmniSure была проверена в двух независимых клинических исследованиях. Одно исследование проводилось в Москве. Другое - в штате Калифорния, США.

Результаты клинических испытаний

Чувствительность: 99%. Специфичность: 100%. Положительная диагностическая значимость: 100%. Отрицательная диагностическая значимость: 99%.

Параллельно с нитразиновым тестом и тестом кристаллизации пациентки исследовались с помощью AmniSure. Если между AmniSure и другими тестами были расхождения, пациентка помещалась под тщательное клиническое наблюдение. Во всех случаях таких расхождений оказалось, что результаты теста AmniSure были точнее. Описанный выше протокол исследования привел к появлению двух наборов данных: "скорректированные результаты" и "нескорректированные результаты". Нескорректированные результаты были собраны исходя из посылки, что тест AmniSure дал неправильные результаты в случае расхождения с другими тестами. После тщательного наблюдения за всеми этими случаями и подтверждения того, что во всех случаях расхождения тест AmniSure дал правильные результаты, был составлен набор "скорректированных" данных. В результате тест AmniSure оказался гораздо точнее других исследованных тестов.

Исследования интерференции

Вагинальные инфекции или примесь мочи не влияют на результаты теста AmniSure. Тщательное изучение и анализ показали, что при влагалищных инфекциях концентрация ПАМГ-1 во влагалище никогда не превышала 3 нг/мл. Уровень чувствительности AmniSure составляет 5-7 нг/мл, исключая интерференцию, связанную с инфекциями. Концентрация ПАМГ-1 в сперме не превышает 4 нг/мл. Концентрация ПАМГ-1 спермы во влагалище даже ниже из-за эффекта снижения концентрации в 4 раза при попадании спермы во влагалище. Поэтому при разработке и апробации теста AmniSure не было отмечено никакой интерференции со спермой. Это же относится и к моче. Пятнадцать образцов мочи исследовались на концентрацию ПАМГ-1 методом ИФА. Чувствительность ИФА составила 0,5 нг/мл. Параллельно использовался тест AmniSure. Образцы были получены от беременных женщин со сроками беременности 25 - 40 недель. Оба метода дали отрицательные результаты. ПАМГ-1 не был обнаружен ни в одном случае.

Перекрестная реактивность

Специфичность моноклональных антител, использованных в AmniSure изучалась при исследовании их перекрестной реактивности со следующими белками: α2-микроглобулин фертильности, человеческий хорионический гонадотропин, трофобластический β1-гликопротеин, человеческий плацентарный лактоген, α-фетопротеин, альбумин сыворотки человека и некоторые инсулиноподобные факторы роста. Моноклональные антитела A и B, используемые в AmniSure не реагировали с этими белками, с одним исключением: антитела B перекрестно реагировали с инсулиноподобным фактором роста BP-1 при использовании ИФА-метода. Было показано, что концентрации IGFBP-3 во влагалище у беременных женщин могут достигать 680 нг/мл, но это не оказывало влияния на результаты теста AmniSure.

Стабильность результатов

AmniSure является тест-системой, результаты которой должны быть считаны через 5 - 10 мин после погружения тестовой полоски в пробирку. Стабильность теста изучалась в лоте, содержащем 1000 наборов. Очищенный ПАМГ-1 использовался в концентрациях от 10 до 5 нг/мл в физиологическом растворе. Продолжительность и стабильность результатов также определялись. После того как результат становился видимым (появлялись полоски в тестовой зоне), он оставался стабильным не менее 5 минут. Стабильность теста наблюдалась даже при очень малых концентрациях ПАМГ-1 (5-10 нг/мл). Если концентрации были выше, полоски оставались стабильными в течение часов после исследования. Следовательно, стабильность теста составляет 5 минут, а время проведения теста - 10 полных минут.

Таблица 1

Результаты исследования стабильностиКонцентрация очищенного ПАМГ-1 в физрастворе (нг/мл)Время, прошедшее до появления окрашивания в тестовой зоне10~2,5 мин5~5,5 минЛИТЕРАТУРАCousins LM et al., "AmniSure Placental Alpha Microglobulin-1 Rapid Immunoassay versus Standard Diagnostic Methods for Detection of Rupture of Membranes", Am J Perinatol 2005; 22: 317-320. Mercer B.M. et al., Am J Obstet Gynecol 2000, Sep; 183 (3):738-45. French J.I., McGregor J.A., The Pathobiology of premature rupture of membranes. Seminars in Perinatology, 1996, 20, No 5, pp. 344-368. Furman B. et al., Clinical significance and outcome of preterm prelabor rupture of membranes: population-based study. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 2000, Oct; 92 (2):209-16. Mercer B.M. et al., Am Journal Obstet Gynecol 2000, Sep; 183 (3):738-45. Lockwood C.J. et al., Am. J. Obstet. Gynecol. 1994, 171, No 1, pp.146-150. Darj E., Lyrenas S., Acta Obstet. Gynecol. Scand.,1998, 77, pp.295-297 Gorodeski I.G, Haimovitz L., Bahari C.M., 1982, Journal Perinat. Med; 10 (6):286-92 D. Petrunin, "Immunochemical identification of organ specific human placental alpha-globulin and its concentration in amniotic fluid", Akush Ginekol (Mosk) 1977 Jan(1):64-5 Y. Tatarinov, D. Petrunin et al. 1980; "Two new Human Placenta-Specific ?-Globulins: Identification, Purification, Localization, and Clinical Investigation", The Human Placenta, Ed by A.Klopper et al., Acad. Press, London-NY, pp.35-46