Ограничивающие условия определены нами опытным путем в результате анализа жизнеспособности клеток от 112 плодов (p<0,05). В работу принимаются плоды без генетических аномалий и без нарушений целостности кожных покровов.
Плод тщательно обрабатывают раствором детергента и отмывают дистиллированной водой. Пуповину отделяют. Затем забирают следующие органы: тимус, сердце, легкие, печень, селезенка, поджелудочную железу, надпочечники, почки, гонады, желудок, тонкий кишечник, брыжейка, спинной мозг, щитовидную железу, глаза. Кроме того, выделяют хрящи из всех суставов плода и снимается кожа с живота и спины. Перед разделением тканей мозга мозговые оболочки обязательно отделяются и в дальнейшем используются для получения клеточных культур. Из головного мозга забирают: мозжечок, мозговой ствол, эпифиз, гипоталамус, таламус, базальные ядра, затылочные доли, теменные доли, височные доли, лобные доли. Гипофиз не изолируется вместе со всем мозгом и может быть отделен в последнюю очередь.
Органы измельчают в стерильной чашке Петри стерильными, острыми ножницами до визуально гомогенного состояния, затем в гомогенат, добавляют 10 - 15 мл охлажденного (+4oC) стерильного физраствора и суспендируют стерильной пипеткой. После этого одноразовым шприцом через иглу 0,8х38 производят дополнительную гомогенизацию. Полученный гомогенат переносят в стерильные центрифужные пробирки, содержащие 5-кратный объем охлажденного (+4oC) стерильного физраствора. Пробирку оставляют на 3-5 мин для осаждения недезагрегированных кусочков ткани, затем надосадочную жидкость, содержащую отдельные клетки, отбирают и переносят в другую стерильную центрифужную пробирку. Осадок, содержащий кусочки ткани, подвергают дополнительной механической или энзиматической дезагрегации. Суспензию клеток центрифугируют в течение 10 мин при 1000 оборотах в мин, после чего надосадочную жидкость сливают.
http://www.findpatent.ru/patent/216/2160112.html
© FindPatent.ru - патентный поиск, 2012-2018