"Один из самых важных этапов программы ЭКО - эмбриологический. Именно от того, как будет выполнена оценка качества оплодотворения яйцеклетки, а также последующее культивирование до созревания эмбрионов зависит успешный результат экстракорпорального оплодотворения. 
День 0- пункция фолликулов и оплодотворение:
На тот момент, когда в процессе ЭКО осуществляется пункция фолликулов, яйцеклетки находятся в комплексе ооцит+cumulus, иногда и с частицами фолликулярного эпителия.
Фолликулярную жидкость проверяют на наличие комплексов яйцеклеток+cumulus. Как правило, яйцеклетки можно разглядеть невооружённым глазом, выглядят они как слизистые сгустки размером 5-10 мм.
После того, как ооциты помещены в культуральную среду, специалист предварительно оценивает их количество, качество и степень зрелости. Причём комплексы ооцит +cumulus не всегда позволяют дать истинную оценку яйцеклетки.
У пунктированной яйцеклетке должно быть закончено первое деление мейоза, после которого отделяется первое полярное тельце. Второе деление, как правило, находится в стадии метафазы. Хромосомы образуют ряд, создавая тем самым метафазную пластинку, располагающуюся прямо над полярным тельцем. При этом в яйцеклетке осуществляется блок мейоза, снять который способен лишь сперматозоид, проникнувший сквозь оболочку.
Сперматозоиду, перед тем, как проникнуть в ооцит, следствием чего становится оплодотворение яйцеклетки, предстоит преодолеть ряд препятствий:
1) Сumulus - проникая вовнутрь него глубже, сперматозоид увеличивает свою скорость, демонстрируя фазу гиперактивности.
2) Zona pellucida - здесь сперматозоид связывается с рецептором.
После этого осуществляется акросомная реакция, при которой цитоплазматическая мембрана яйцеклетки и мембрана акросомы сперматозоида объединяются. Содержимое акросомы выбрасывается, связывается с zona pellucida и сперматозоид проникает через оболочку яйцеклетки, не теряя своей активности.
На том месте, которое располагается между оболочкой яйцеклетки и zona pellucida, сперматозоид присоединяется своими рецепторами к рецепторам, которые располагаются на оболочке яйцеклетки. Это способствует возникновению кортикальной реакции, которая становится причиной необратимых процессов zona pellucida, что делает её недоступной для проникновения других сперматозоидов.
День 1 - оценка оплодотворения:
Через 16-18 часов оценивается наличие признаков оплодотворения и качество зигот. Наличие в яйцеклетке 2-х пронуклеусов (PN) и 2 полярных тел (PB) указывает на нормальное развитие процесса оплодотворения. Пронуклеусы - это ядра половых клеток (сперматозоида и яйцеклетки) несущих по половине генетического материала от каждого родителя.
На этой стадии очень важно отбраковать аномально оплодотворившиеся эмбрионы: моноплоиды (1 пронуклеус), триплоиды (3) и полиплоиды(4 и более).
Зиготы с 3 ядрами (пронуклеусами) могут появлятся в результате:
1. Оплодотворения ооцита 2-мя сперматозоидами (чаще всего 2-мя сперматозоидами оплодотворяются яйцеклетки неудовлетворительного качества)
2. Оплодотворения ооцита аномальным сперматозоидом с двойным набором хромосом (все клетки человека имеют 46 хромосом-диплоидный набор. Зрелая яйцеклетка и сперматозоид имеют 23-гаплоидный набор. Образование сперматозоида с двойным набором хромосом (46) происходит при нарушениях процесса созревания гаметы)
3. Невыделения ооцитом 2-го полярного тельца (изначально незрелая яйцеклетка содержит 46 хромосом. Процесс созревания яйцеклетки - это хромосомные преобразования ведущие к формированию ооцита с гаплоидным набором хромосом. Гаплоидность достигается за счёт выделения 2-х полярных телец. Первое формируется у яйцеклетки готовой к оплодотворению, второе можно увидеть после оплодотворения, т.е. в норме видно 2 полярных тельца)
Полиплоиды появляются в результате оплодотворения яйцеклетки неудовлетворительного качества несколькими сперматозоидами или в результате сочетания вышеперечисленных факторов.
День 2- начало дробления
На 2-е сутки после слияние генетического материала сперматозоида и яйцеклетки происходит дробление - деление клетки на 2 и 4. Клетки дробящегося эмбриона называются бластомерами.
На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (%безъядерных фрагментов цитоплазмы), чем она больше - тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров (T.Hardarson, 2001). Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству - A-B-C-D, где A - самый лучший, D - самый худший. Цифрами указывают количество бластомеров.
Оценка качества эмбрионов по степени фрагментации:Тип А - эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А)
Тип В - эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В)
Тип С - эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С)
Тип D - эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D)
Пример записи - (6В) - 6 клеточный эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20%
На этой же стадии оценивается равномерность бластомеров и количество ядер в них (в норме по 1).
День 3 - дробление
Еще через сутки эмбрион, как правило, уже состоит из 6-8 бластомеров. По литературным данным, «генетическая машина» эмбриона запускается на 4-х клеточной стадии, в конце вторых - начале третьих суток развития. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки: «опечатки»-мутации, «нет нужных страниц»-делеции или «лишние страницы» - дупликации, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).
День 4 - морула
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) - начинается стадия морулы (от лат. morulae - тутовая ягода). К этой стадии in vivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость - начинается процесс кавитации.
Оценка морулы / компактизованного эмбриона:
(A) Grade 4: эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко, но ядра различимы.
(B) Grade 3: компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
(C) Grade 2: частичная компактизация (около 50% бластомеров), аномальная морфология эмбриона.
(D) Grade 1: компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры.
Пример записи - (М3) - морула с компактизацией более 75% бластомеров.
День 5 - бластоциста
С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой.
В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х до середины 6-х суток развития, чаще это происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток - трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за имплантацию - внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт - тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившаяся за счет растяжения блестящая оболочка (ZP) разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева) эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки. Имплантация происходит, как правило, на 6-7 день развития эмбриона.
Классификация эмбрионов на стадии бластоцисты.
1 степень - ранняя бластоциста, полость бластоцисты меньше половины объема эмбриона.
2 степень - полость бластоцисты больше половины объема эмбриона.
3 степень - полная бластоциста. Полость полностью занимает объем эмбриона.
4 степень - расширенная бластоциста. Полость бластоцисты становится больше и начинает истончаться ZP.
5 степень - трофэктодерма ничинает проникать через ZP.
6 степень - вылупившаяся бластоциста, покинувшая ZP.
Внутриклеточная масса (ВКМ):
А - плотно упакованная с большим количеством клеток.
В - более свободная группировка среднего количества клеток.
С - незначительное количество клеток
Трофэктодермальный слой:
А - много клеток, формирующих трофэктодерму.
В - немного клеток.
С - незначительное количество больших клеток.
Пример записи - (4АА) - расширенная бластоциста, вкм - плотно упакованная с большим количеством клеток, много клеток формирующих трофэктодерму.
