День забора яйцеклеток (пункции) будем считать нулевым. В этот день через несколько часов после пункции яйцеклетки (ооциты) оплодотворяют методом стандартного ЭКО или ИКСИ. Яйцеклетка окружена блестящей оболочкой, являющейся защитой эмбриона вплоть до имплантации.
Зрелая яйцеклетка
1-й день развития. На 1-й день оценивается как прошло оплодотворение. При наличии в яйцеклетке 2х пронуклеусов (ядер) - мужского и женского - считается, что оплодотворение прошло успешно. Остальные эмбрионы (без пронуклеусов, с одним или тремя и более пронуклеусами) отбраковываются. Перенос на стадии пронуклеусов (1-е сутки развития) практикуется крайне редко, однако криконсервировать (замораживать) оплодотворенные яйцеклетки на этой стадии уже можно. Так поступают в Германии и Швейцарии, где закон запрещает криоконсервировать эмбрионы.
Оплодотворенная яйцеклетка с 2мя пронуклеусам
2-й день развития. На 2-е сутки мужской и женский геномы уже слились (образовалась зигота) и вскоре после этого прошло первое деление дробления, после которого мы уже говорим об эмбрионе, а не оплодотворенной яйцеклетке. Клетки дробящегося эмбриона называются бластомерами. Обычно в этот день эмбрион может состоять из 2х, 3х или 4х бластомеров, причем четное число клеток предпочтительней, но не обязательно. На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому безъядерными фрагментами цитоплазмы), чем их больше - тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров. Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству - A-B-C-D, где A - самый лучший, D - самый худший.
4х клеточный эмбрион хорошего качества
3-й день развития. Еще через сутки эмбрион в норме уже состоит из 6-8 бластомеров, однако допускается и 4 бластомера, если на 2-е сутки эмбрион был 2х-клеточным. До 8-клеточной стадии все клетки эмбриона человека тотипотентны, т.е. каждая из них может дать начало целому организму. В конце вторых - начале третьих суток развития включается собственный геном эмбриона (т.е. геном, образованный при слиянии ядра сперматозоида и ядра яйцеклетки). До этого момента эмбрион развивался как бы "по инерции", исключительно на материнских "запасах", накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. От того какой геном был сформирован при оплодотворении и о того насколько успешно и своевременно произойдет это переключение напрямую зависит дальнейшее развитие эмбриона. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров многие эмбрионы останавливаются в развитии (так называемый "блок развития in vitro")- в их геноме имеются существенные ошибки, доставшиеся от родительских гамет или возникшие в процессе их слияния.
8-ми-клеточный эмбрион хорошего качества
4-й день развития. На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже как правило из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) - начинается стадия морулы (от лат. morulae - тутовая ягода). Именно на этой стадии in vivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость - начинается процесс кавитации.
Компактная морула
5-6-й день развития. С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4х по середину 6-х суток развития, чаще это происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток - трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за имплантацию - внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт - тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившааяся за счет растяжения блестящая оболочка разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева) эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки. Имплантация происходит как правило на 6-7 день развития эмбриона.
Так на какой же день лучше вернуть эмбрион в организм матери? Нет единого ответа на этот вопрос. Обычно решение о дне переноса принимает эмбриолог, учитывая количество и качество полученных эмбрионов, анамнез женщины, количество предыдущих безуспешных попыток ЭКО/ИКСИ и эмбриологический анамнез (если он доступен). Рассмотрим плюсы и минусы переноса на разные сутки.
1-е сутки.
+ Минимизация времени пребывания вне организма (и потенциального вредного воздействия условий культивирования)
- Не физиологично, в организме женщины эмбрион в это время находится в маточной трубе, а не в матке.
- Выбор затруднен из-за отсутствия четких общепринятых критериев качества
- Собственный геном еще "молчит"
2-е сутки.
+ Минимизация времени пребывания вне организма (и потенциального вредного воздействия условий культивирования)
+ По сравнению в 1-ми сутками легче сделать выбор наиболее качественных эмбрионов, т.к. эмбрионы уже приступили к дроблению и больше параметров развития доступно для оценки
- Собственный геном еще "молчит" - невозможность отбраковки эмбрионов с серьезными нарушениями генома
- Невозможность проведения полноценной преимплантационной генетической диагностики (если она показана)
3-и сутки.
Наиболее часто встречающийся вариант.
+ По сравнению со 2-ми сутками выбор облегчен, т.к. некоторые эмбрионы уже замедлили свое развитие или остановились
- Собственный геном, как правило, еще "молчит" - невозможность отбраковки эмбрионов с серьезными нарушениями генома
- Невозможность проведения полноценной преимплантационной генетической диагностики - ПГД -(если она показана)
4-е сутки.
+ Максимальная физиологичность момента попадания в матку - именно на стадии морулы эмбрион попадает туда при естественном развитии событий
+ Преодолен так называемый "блок развития" in vitro
+ Есть время для проведения ПГД если это необходимо
- Крайне сложно оценить морулы по качеству, т.к. границы между клетками сглажены и невозможно посчитать кол-во клеток
- Возможное отсутствие эмбрионов на перенос (если все остановились в развитии) - серьезный стресс для пациентов. В этой ситуации никогда нельзя сказать наверняка - остановка произошла из-за внутренних генетических дефектов эмбрионов или свое негативное влияние оказали условия культивирования.
5-е сутки.
+ Частота имплантации перенесенных бластоцист выше таковой 2-3-х-дневных эмбрионов (приблизительно 50% против 25%)
+ Выжили и развиваются сильнейшие эмбрионы. Это не гарантирует их от генетических проблем, но все же снижает вероятность их проявления
+ Преодолен так называемый "блок развития" in vitro
+ Есть время для проведения ПГД если это необходимо
+ Оценка качества бластоцист достаточно проста и эффективна
- Возможное отсутствие эмбрионов на перенос (если все остановились в развитии) - серьезный стресс для пациентов. В этой ситуации никогда нельзя сказать наверняка - остановка произошла из-за внутренних генетических дефектов эмбрионов или свое негативное влияние оказали условия культивирования. В среднем до стадии бластоцисты в условиях in vitro доживают около половины эмбрионов.
Как видите, у каждого варианта имеются свои плюсы и минусы. Обычно стратегия выглядит так: при наличии более 3-4 эмбрионов хорошего качества на 3-и сутки развития можно рискнуть и растить их до стадии бластоцисты, чтобы с большей гарантией отобрать из них самых-самых. Но если хороших эмбрионов на 3-и сутки не более 2х, то не имеет никакого смысла растить их дальше - в материнском организме им однозначно будет ЛУЧШЕ.
Анна Гусаров
эмбриолог клиники репродуктивного здоровья "АРТ-ЭКО".