ве этапы культивирования эмбрионов
Все этапы культивирования эмбрионов контролирует эмбриолог.
После слияния генетического материала (ДНК) яйцеклетки и сперматозоида образуется зигота. Первый клеточный цикл деления является самым длинным и занимает около 24 часов.
Полученные две равноценные клетки называют бластомерами.
Бластомеры — клетки, изначально идентичные по структуре, биохимии и потенциалу развития. Они обладают замечательным свойством — способностью образовывать в последующем любые клетки тела. Однако, такая способность теряется на стадии 8 бластомеров, т.к. далее бластомеры приобретают специализацию. В силу этого, повреждения эмбриона, возникшие на стадии до 8 бластомеров, легко компенсируются.
В это же время возможно разделение эмбриона на 2 и более части, дающие начало однойяцевым близнецам…
Впоследствии дробление эмбриона продолжается.
На 2-е сутки (48 час.) после пункции — стадия 2-4 бластомера (возможно и 6-8 бластомеров).
Часть эмбрионов в это время может отставать в развитии либо прекращает деление полностью.
На 3-4 е сутки — 6-8 бластомеров ( возможно 8-16).
При достижении стадии 12-14 бластомеров эмбрион приобретает шаровидную форму с гладкими контурами и называется морулой.
В естественных условиях эмбрион попадает в матку именно на этой стадии.
На 5-е сутки -бластоциста (т.е. более 16 бластомеров).
Бластоциста на 5 сутки выходит из своей оболочки, происходит естественный хэтчинг (выклев).
Оболочка к тому моменту уже истончена и растянута, через небольшой разрыв бластоциста освобождается и приступает к имплантации.
Возможность культивирования до стадии бластоцисты открывает большие возможности при отборе лучших эмбрионов, делает более физиологичным момент попадания эмбриона в матку, а также повышает процент имплантации.
Часто наши пациентки слышат о так называемом качестве эмбрионов. Что это?
Эмбрионы оцениваются по форме и наличию или отсутствию фрагментации, скорости их дробления и, как следствие, предположительной способности имплантации (прикрепление эмбриона в матке после переноса).
класс 1 (А) — отличное качество эмбрионов.
Для них характерны:
– наибольшая скорость дробления,
– правильная форма бластомеров, четкие контуры,
– отсутствие безъядерных фрагментов,
а значит, высокая способность имплантации.
класс 2 (В) – хорошее
неровные бластомеры и/или неровные фрагменты цитоплазмы менее 10% объема
высокая способность имплантации
класс 3 (С) -удовлетворительное
наличие фрагментации 10-50%
класс 4 (D) – неудовлетворительное
наличие фрагментации более 50%
К сожалению, в мире нет единой принятой системы оценки «качества» зародыша. Как правило, учитываются следующие показатели: количество клеток, упорядоченность их расположения, степень фрагментации, толщина оболочек вокруг эмбриона и т.п.
Обычно качество зародыша оценивается не ранее чем через 48 часов после извлечения яйцеклетки. К этому сроку (к концу второго дня) должно быть не менее двух клеток, лучше, если эмбрион состоит из 3-4 клеток. Через 72 часа (к концу третьего дня) эмбрион должен состоять по крайней мере из 6 клеток, а лучше — из 7 и более. В целом больше шансов выжить у эмбрионов, состоящих из большего числа клеток, упорядоченно расположенных и при отсутствии фрагментации. Качество эмбрионов оценивается под микроскопом в ЭКО-лаборатории, что позволяет прогнозировать вероятность развития беременности после переноса эмбриона. Однако в данный процесс вмешивается еще множество факторов, которые на современном уровне развития науки невозможно учесть, поэтому полученные прогнозы не всегда сбываются.
Эмбрионы, полученные после оплодотворения ооцитов одной и той же пациентки, часто отличаются по скорости дробления и морфологическим парамет¬рам. Общепризнанным считается, что максимальную способность к имплантации имеют эмбрионы с наибольшей скоростью дробления, бластомеры которых имеют регулярную форму, а безъядерные фрагменты отсутствуют. Такие эмбрионы относят к классу 1 (А). Градация эмбрионов по качеству является условной и различается в разных лабораториях. Однако в ос¬нове ее лежит, как правило, характер фрагментации эмбриона, форма и размер бластомеров. Так, эмбрион с неравными бластомерами и/или фрагментами ци¬топлазмы, занимающими менее 10% объема, соответ¬ствует классу 2 (В); при наличии фрагментации 10 50% классу 3 (С), более 50% классу 4 (D).
Работы по анализу влияния качества переносимых в полость матки эмбрионов на частоту их имплантации многочисленны, но трудносопоставимы в силу разных методик оценки качества. Около 20% переносимых эмбрионов А-В класса имплантируются, однако эта частота падает до 1,5% для сильно фрагментированных эмбрионов. Впечатляют результаты клиники Bourn Hall (Англия), в которых показано, что 90% пациенток, забеременевших после ЭКО и ПЭ, по¬лучали при переносе эмбрионов хотя бы один эмбрион класса А. В той же работе не было выявлено зависимости между качеством переносимых эмбрионов и частотой невынашивания беременности.
Причинами плохого качества эмбрионов могут быть
плохое качество спермы или плохое качество яйцеклетки. Считается, что если эмбрион плохо растет изначально, то проблема в яйцеклетке, а если развитие первые двое суток идет хорошо, а потом начинаются проблемы, то дело в плохом качестве спермы.
Классификация бластоцист.
Существует несколько классификаций бластоцист, но все они похожи. Качество бластоцисты определяется тремя основными параметрами – размером (объемом полости бластоцисты), качеством внутренней клеточной массы (клтеки, дающие начало всем тканям будущего зародыша) и качеством трофэктодермы (клеток, дающим в последствии начало всем внезародышевым оболочкам – хориону, плаценте. Также отмечается наличие/отсутствие естественного хэтчинга – точечного разрыва оболочки эмбриона и выклева бластоцисты из нее.
Цифрами обозначается размер бластоцисты – стадия ее экспансии.
1 – ранняя, полость около половины объема бластоцисты;
2 – средняя, полость более половины объема, но размер бластоцисты не сильно больше размера дробящегося эмбриона;
3 – экспандированная бластоциста – полость занимает большую часть объема бластоцисты, блестящая оболочка истончена, объем бластоцисты в 2 и более раза превышает объем дробящегося эмбриона;
4 – бластоциста, вступившая в естественный хэтчинг (выклев);
5 – бластоциста в хэтчинге после проведения ПГД;
6 – полностью вылупившаяся бластоциста.
Первая буква обозначает качество внутренней клеточной массы – массы клеток, из которой в будущем будет развиваться сам эмбрион.
А – плотно упакованная, достаточная по размеру ВКМ, хорошо различима, отсутствуют включения, вакуоли, тяжи и пр.;
B – ВКМ хорошо различима, но имеет незначительные дефекты (небольшой объем, неплотно упакована, мало клеток, есть включения и т.п.);
С – ВКМ либо неразличима, либо имеет серьезные нарушения в структуре;
D – дегенеративная ВКМ.
Второй буквой аббревиатуры обозначается качество трофобласта – клеточного слоя, полностью окружающего бластоцисту. Впоследствии из него разовьются все внезародышевые оболочки эмбриона, он отвечает за внедрение эмбриона в стенку матки – имплантацию.
А – трофобласт хорошо организован, многоклеточный и однослойный;
В – трофобласт состоит из нескольких слоев клеток, клетки распределены неравномерно либо клеток меньше, чем в норме;
С – трофобласт состоит из небольшого числа клеток, либо имеет включения, вакуоли, тяжи и иные отклонения от нормы;
D – дегенеративный трофобласт.