Оценка качества зигот/эмбрионов

Девочки, я думаю, что мы и так уже всё знаем на эту тему))) Но может кому пригодится эта статья.

1-й день развития. На 1-й день оценивается наличие признаков оплодотворения и качество зигот. Наличие в яйцеклетке 2х пронуклеусов (PN) и 2 полярных тел (PB) указывает на нормальное развитие процесса оплодотворения. Пронуклеусы — это ядра половых клеток (сперматозоида и яйцеклетки) несущих по половине генетического материала от каждого родителя (22 аутосомные и 1 половую хромосомы). Ооцит содержит Х хромосому. Именно сперматозоид несущий половую хромосому X или Y определяет физиологический пол будущего ребенка. Внешне данные сперматозоиды не различимы, однако существуют методы предопределения и диагностики пола будушего ребенка. Не оплодотворившиеся и с аномальным оплодотворением яйцеклетки (более 2 пронуклеусов) отсаживаются и наблюдаются. Разработано несколько «систем оценки зигот» или «систем оценки пронуклеусов» (Ludwig M et al, 2000; Scott L et al, 2000 и т.д.). Наибольшее внимание уделяется: размеру и симметричности пронуклеусов, числу, количеству, равности и распределению нуклеолей, включениям цитоплазмы

2-й день развития. На 2-е сутки после слияние генетического материала сперматозоида и яйциклетки происходит дробление — деление клетки на 2. Клетки дробящегося эмбриона называются бластомерами. На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому безъядерными фрагментами цитоплазмы), чем она больше — тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров (T.Hardarson, 2001). Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству — A-B-C-D, где A — самый лучший, D — самый худший. Цифрами указывают количество бластомеров.

Оценка качества эмбрионов по степени фрагментации (A. Van Steiterghem et al., 1995)

• Тип А — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А)
• Тип В — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В)
• Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С)
• Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D)

Пример записи — (6В) — 6 клеточный эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20%

3-й день развития. Еще через сутки эмбрион, как правило, уже состоит из 6-8 бластомеров. По литературным данным, «генетическая машина» эмбриона запускается на 4-х клеточной стадии, в конце вторых — начале третьих суток развития. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки: «опечатки»-мутации, «нет нужных страниц»-делеции или «лишние страницы» — дупликации, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).

4-й день развития. На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) — начинается стадия морулы (от лат. morulae — тутовая ягода). Именно на этой стадии in vivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость — начинается процесс кавитации.

Оценка морулы / компактизованного эмбриона (Tao J et al., HR, V 17, No 6, 2002)

• (A) Grade 4: эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко, но ядра различимы.
• (B) Grade 3: компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
• (C) Grade 2: частичная компактизация (около 50% бластомеров), аномальная морфология эмбриона.
• (D) Grade 1: компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры.

Пример записи — (М3) — морула с компактизацией более 75% бластомеров.

5-6-й день развития. С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4х по середину 6-х суток развития, чаще это происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток — трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за имплантацию — внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт — тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившаяся за счет растяжения блестящая оболочка (ZP) разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева) эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки. Имплантация происходит, как правило, на 6-7 день развития эмбриона.

Классификация эмбрионов на стадии бластоцисты.
(D.Gardner, et al., 1999).Степень зрелости бластоцисты:

• 1 степень — ранняя бластоциста, полость бластоцисты меньше половины объема эмбриона.
• 2 степень — полость бластоцисты больше половины объема эмбриона.
• 3 степень — полная бластоциста. Полость полностью занимает объем эмбриона.
• 4 степень — расширенная бластоциста. Полость бластоцисты становится больше и начинает истончаться ZP.
• 5 степень — трофэктодерма ничинает проникать через ZP.
• 6 степень — вылупившаяся бластоциста, покинувшая ZP.

Внутриклеточная масса (ВКМ):

• А — плотно упакованная с большим количеством клеток.
• В — более свободная группировка среднего количества клеток.
• С — незначительное количество клеток

Трофэктодермальный слой:

• А — много клеток, формирующих трофэктодерму.
• В — немного клеток.
• С — незначительное количество больших клеток.

Пример записи — (4АА) — расширенная бластоциста, вкм — плотно упакованная с большим количеством клеток, много клеток формирующих трофэктодерму.

Преимущества и недостатки переноса эмбрионов на 5 сутки развития

Интересно, что, хотя первая основополагающая публикация по вспомогательным репродуктивным технологиям (ВРТ) описывала развитие человеческих эмбрионов в пробирке до стадии бластоцисты (рисунок 1) [Steptoe et al., 1971], в последующем процедура ЭКО основывалась на переносе эмбрионов в полость матки на стадии дробления (рисунок 2) (2-3 сутки развития). В последнее десятилетие культивирование эмбрионов до 5 суток приобрело популярность в практике ЭКО [Wilson et al., 2002].

Рисунок 1. Рисунок 2.

Основой для этой новой стратегии послужили научные данные, основанные на том, что эмбрион не имплантируется до 5 суток, а перенос на 2-3 сутки дает относительно низкий уровень имплантации [Nyboe Andersen et al., 2004]. Кроме того, раскрытие метаболических потребностей эмбриона во время развития легло в основу разработки последовательных систем культивирования до 5 суток, с хорошим процентом выживаемости эмбрионов [Gardner et al., 1998].
Преимуществом переноса на 5 сутки является - высокая корреляция между морфологией эмбриона и генетическими аномалиями. Так, эмбрион отличного качества (top-quality) на стадии дробления в 60% случаев может нести дефектный генетический материал, тогда как только у 30% top-quality бластоцист выявляются хромосомные аномалии [Staessen и др.., 2004]. Это позволяет отобрать эмбрионы наилучшего качества на перенос и увеличить вероятность возникновения беременности. Лучшая синхронизация с эндометрием увеличивает имплантационный потенциал эмбрионов. С другой стороны, перенос бластоцист имеет определенные недостатки, такие, как отсутствие одного дня совместного развития с клетками эндометрия (эмбрион спускается в полость матки на 4 день развития); вероятность остановки развития эмбрионов до стадии бластоцисты и как следствие - отмена переноса. Несмотря на эти недостатки, по данным 282 исследований, доказано, что вероятность рождения ребенка выше при переносе эмбриона на стадии бластоцисты (5 день развития) по сравнению с переносом эмбриона на стадии дробления (2-3 день развития).