Про загадочный PN в эмбриолисте

1-й день развития. На 1-й день оценивается наличие признаков оплодотворения и качество зигот. Наличие в яйцеклетке 2х пронуклеусов (PN) и 2 полярных тел (PB) указывает на нормальное развитие процесса оплодотворения. Пронуклеусы - это ядра половых клеток (сперматозоида и яйцеклетки) несущих по половине генетического материала от каждого родителя (22 аутосомные и 1 половую хромосомы). Ооцит содержит Х хромосому. Именно сперматозоид несущий половую хромосому X или Y определяет физиологический пол будущего ребенка. Внешне данные сперматозоиды не различимы, однако существуют методы предопределения и диагностики пола будушего ребенка. Не оплодотворившиеся и с аномальным оплодотворением яйцеклетки (более 2 пронуклеусов) отсаживаются и наблюдаются. Разработано несколько «систем оценки зигот» или «систем оценки пронуклеусов» (Ludwig M et al, 2000; Scott L et al, 2000 и т.д.). Наибольшее внимание уделяется: размеру и симметричности пронуклеусов, числу, количеству, равности и распределению нуклеолей, включениям цитоплазмы

2-й день развития. На 2-е сутки после слияние генетического материала сперматозоида и яйциклетки происходит дробление - деление клетки на 2. Клетки дробящегося эмбриона называются бластомерами. На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому безъядерными фрагментами цитоплазмы), чем она больше - тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров (T.Hardarson, 2001). Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству - A-B-C-D, где A - самый лучший, D - самый худший. Цифрами указывают количество бластомеров.

Оценка качества эмбрионов по степени фрагментации (A. Van Steiterghem et al., 1995)

• Тип А - эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А)
• Тип В - эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В)
• Тип С - эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С)
• Тип D - эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D)

Пример записи - (6В) - 6 клеточный эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20%

3-й день развития. Еще через сутки эмбрион, как правило, уже состоит из 6-8 бластомеров. По литературным данным, «генетическая машина» эмбриона запускается на 4-х клеточной стадии, в конце вторых - начале третьих суток развития. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки: «опечатки»-мутации, «нет нужных страниц»-делеции или «лишние страницы» - дупликации, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).

4-й день развития. На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) - начинается стадия морулы (от лат. morulae - тутовая ягода). Именно на этой стадии in vivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость - начинается процесс кавитации.

Оценка морулы / компактизованного эмбриона (Tao J et al., HR, V 17, No 6, 2002)

• (A) Grade 4: эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко, но ядра различимы.
• (B) Grade 3: компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
• (C) Grade 2: частичная компактизация (около 50% бластомеров), аномальная морфология эмбриона.
• (D) Grade 1: компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры.

Пример записи - (М3) - морула с компактизацией более 75% бластомеров.

5-6-й день развития. С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4х по середину 6-х суток развития, чаще это происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток - трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за имплантацию - внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт - тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившаяся за счет растяжения блестящая оболочка (ZP) разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева) эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки. Имплантация происходит, как правило, на 6-7 день развития эмбриона.

Классификация эмбрионов на стадии бластоцисты.
(D.Gardner, et al., 1999).

Степень зрелости бластоцисты:

• 1 степень - ранняя бластоциста, полость бластоцисты меньше половины объема эмбриона.
• 2 степень - полость бластоцисты больше половины объема эмбриона.
• 3 степень - полная бластоциста. Полость полностью занимает объем эмбриона.
• 4 степень - расширенная бластоциста. Полость бластоцисты становится больше и начинает истончаться ZP.
• 5 степень - трофэктодерма ничинает проникать через ZP.
• 6 степень - вылупившаяся бластоциста, покинувшая ZP.

Внутриклеточная масса (ВКМ):

• А - плотно упакованная с большим количеством клеток.
• В - более свободная группировка среднего количества клеток.
• С - незначительное количество клеток

Трофэктодермальный слой:

• А - много клеток, формирующих трофэктодерму.
• В - немного клеток.
• С - незначительное количество больших клеток.

Пример записи - (4АА) - расширенная бластоциста, вкм - плотно упакованная с большим количеством клеток, много клеток формирующих трофэктодерму.

Преимущества и недостатки переноса эмбрионов на 5 сутки развития>>