Оценка качества эмбрионов на сегодняшний день происходит в основном по
морфологии - внешнему облику эмбриона. Морфологических параметров и
характеристик эмбриона очень много, однако основное значение для
эмбрионов 2-3 дня развития имеет количество клеток (оно должно
соответствовать дню развития), степень фрагментации (объем, занимаемый
безъядерными кусочками цитоплазмы эмбриона), равномерность дробления
(бластомеры - клетки эмбриона на стадии дробления - должны иметь
регулярную форму и равные размеры), наличие/отсутствие вакуолей и других
включений в цитоплазму, отсутствие мультиядерных бластомеров (ядро
клетки поделилось, а цитоплазма отстает).
Вот нормы по количеству клеток (бластомеров) в первые дни развития (день пункции - нулевой):
2 сутки - 2-6 клеток
3 сутки - 4-10 клеток
4 сутки - более 8 клеток
Наиболее
часто встречается цифро-буквенная классификация по качеству эмбрионов
2-3 дня. Она отражает главным образом степень фрагментации и количество
клеток в эмбрионе. Записывается это обычно так: 8А, 4В, 2С и т.п., где
цифра означает количество клеток в эмбрионе, а буква - процент
фрагментации.
А - фрагментация отсутствует
В - фрагментация менее 25%
С - фрагментация 25-50%
D - тотальная фрагментация, более 50%. Такие эмбрионы не переносят в полость матки и не криоконсервируют.
Записывается это обычно так: 8А, 4В, 2С и т.п.
Классификация бластоцист.
Существует
несколько классификаций бластоцист, но все они похожи. Качество
бластоцисты определяется тремя основными параметрами - размером (объемом
полости бластоцисты), качеством внутренней клеточной массы (клтеки,
дающие начало всем тканям будущего зародыша) и качеством трофэктодермы
(клеток, дающим в последствии начало всем внезародышевым оболочкам -
хориону, плаценте. Также отмечается наличие/отсутствие естественного
хэтчинга - точечного разрыва оболочки эмбриона и выклева бластоцисты из
нее.
Цифрами обозначается размер бластоцисты - стадия ее экспансии.
1 - ранняя, полость около половины объема бластоцисты;
2 - средняя, полость более половины объема, но размер бластоцисты не сильно больше размера дробящегося эмбриона;
3
- экспандированная бластоциста - полость занимает большую часть объема
бластоцисты, блестящая оболочка истончена, объем бластоцисты в 2 и более
раза превышает объем дробящегося эмбриона;
4 - бластоциста, вступившая в естественный хэтчинг (выклев);
5 - бластоциста в хэтчинге после проведения ПГД;
6 - полностью вылупившаяся бластоциста.
Первая буква обозначает качество внутренней клеточной массы - массы клеток, из которой в будущем будет развиваться сам эмбрион.
А - плотно упакованная, достаточная по размеру ВКМ, хорошо различима, отсутствуют включения, вакуоли, тяжи и пр.;
B
- ВКМ хорошо различима, но имеет незначительные дефекты (небольшой
объем, неплотно упакована, мало клеток, есть включения и т.п.);
С - ВКМ либо неразличима, либо имеет серьезные нарушения в структуре;
D - дегенеративная ВКМ.
Второй
буквой аббревиатуры обозначается качество трофобласта - клеточного
слоя, полностью окружающего бластоцисту. Впоследствии из него разовьются
все внезародышевые оболочки эмбриона, он отвечает за внедрение эмбриона
в стенку матки - имплантацию.
А - трофобласт хорошо организован, многоклеточный и однослойный;
В - трофобласт состоит из нескольких слоев клеток, клетки распределены неравномерно либо клеток меньше, чем в норме;
С - трофобласт состоит из небольшого числа клеток, либо имеет включения, вакуоли, тяжи и иные отклонения от нормы;
D - дегенеративный трофобласт.
Стадии развития эмбриона и скорость их роста
Зрелая яйцеклетка
1-й день развития.
На 1-й день оценивается как прошло оплодотворение. При наличии в
яйцеклетке 2х пронуклеусов (ядер) - мужского и женского - считается, что
оплодотворение прошло успешно. Остальные эмбрионы (без пронуклеусов, с
одним или тремя и более пронуклеусами) отбраковываются. Перенос на
стадии пронуклеусов (1-е сутки развития) практикуется крайне редко,
однако криконсервировать (замораживать) оплодотворенные яйцеклетки на
этой стадии уже можно. Так поступают в Германии и Швейцарии, где закон
запрещает криоконсервировать эмбрионы.
Оплодотворенная яйцеклетка с 2мя пронуклеусами
2-й день развития.
На 2-е сутки мужской и женский геномы уже слились (образовалась зигота)
и вскоре после этого прошло первое деление дробления, после которого мы
уже говорим об эмбрионе, а не оплодотворенной яйцеклетке. Клетки
дробящегося эмбриона называются бластомерами. Обычно в этот день эмбрион
может состоять из 2х, 3х или 4х бластомеров, причем четное число клеток
предпочтительней, но не обязательно. На этой стадии можно оценить
качество эмбриона по степени фрагментации (объему эмбриона, занимаемому
безъядерными фрагментами цитоплазмы), чем их больше - тем ниже считается
потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо
фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров.
Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству -
A-B-C-D, где A - самый лучший, D - самый худший.
4х клеточный эмбрион хорошего качества
3-й день развития.
Еще через сутки эмбрион в норме уже состоит из 6-8 бластомеров, однако
допускается и 4 бластомера, если на 2-е сутки эмбрион был 2х-клеточным.
До 8-клеточной стадии все клетки эмбриона человека тотипотентны, т.е.
каждая из них может дать начало целому организму. В конце вторых -
начале третьих суток развития включается собственный геном эмбриона
(т.е. геном, образованный при слиянии ядра сперматозоида и ядра
яйцеклетки). До этого момента эмбрион развивался как бы "по инерции",
исключительно на материнских "запасах", накопленных в яйцеклетке за
время ее роста и развития в яичнике. От того какой геном был сформирован
при оплодотворении и о того насколько успешно и своевременно произойдет
это переключение напрямую зависит дальнейшее развитие эмбриона. Поэтому
именно на стадии 4-8 бластомеров многие эмбрионы останавливаются в
развитии (так называемый "блок развития in vitro")- в их геноме имеются
существенные ошибки, доставшиеся от родительских гамет или возникшие в
процессе их слияния.
8-ми-клеточный эмбрион хорошего качества
4-й день развития.
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже как правило из 10-16
клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность
эмбриона сглаживается (процесс компактизации) - начинается стадия морулы
(от лат. morulae - тутовая ягода). Именно на этой стадии in vivo (в
организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К
концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость -
начинается процесс кавитации.
Компактная морула
Оценка морулы / компактизованного эмбриона (Tao J et al., HR, V 17, No 6, 2002)
(A) Grade 4: эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко, но ядра различимы.
(B) Grade 3: компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.
(C) Grade 2: частичная компактизация (около 50% бластомеров), аномальная морфология эмбриона.
(D) Grade 1: компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры.
Пример записи — (М3) — морула с компактизацией более 75% бластомеров.
5-6-й день развития.
С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема,
эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты
допускается с конца 4х по середину 6-х суток развития, чаще это
происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток -
трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя
клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за
имплантацию - внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий).
Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым
оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут
формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость
бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт -
тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты
достигает значительного размера, истончившааяся за счет растяжения
блестящая оболочка разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева)
эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса
бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки.
Имплантация происходит как правило на 6-7 день развития эмбриона.