Эмбриологический этап ЭКО

Девочки, искала для себя инфу по тому, что происходит с момента оплодотворения и до бластоцисты. Нашла вот эту статью. Очень доступно и понятно))) Может кого-то, как и меня, в чём-то успокоит!!! А то часто по телефону от эмбриолога мы слышим непонятные слова и начинаем волноваться...

"Один из самых важных этапов программы ЭКО – эмбриологический. Именно от того, как будет выполнена оценка качества оплодотворения яйцеклетки, а также последующее культивирование до созревания эмбрионов зависит успешный результат экстракорпорального оплодотворения.

День 0- пункция фолликулов и оплодотворение:

На тот момент, когда в процессе ЭКО осуществляется пункция фолликулов, яйцеклетки находятся в комплексе ооцит+cumulus, иногда и с частицами фолликулярного эпителия.

Фолликулярную жидкость проверяют на наличие комплексов яйцеклеток+cumulus. Как правило, яйцеклетки можно разглядеть невооружённым глазом, выглядят они как слизистые сгустки размером 5-10 мм.

После того, как ооциты помещены в культуральную среду, специалист предварительно оценивает их количество, качество и степень зрелости. Причём комплексы ооцит +cumulus не всегда позволяют дать истинную оценку яйцеклетки.

У пунктированной яйцеклетке должно быть закончено первое деление мейоза, после которого отделяется первое полярное тельце. Второе деление, как правило, находится в стадии метафазы. Хромосомы образуют ряд, создавая тем самым метафазную пластинку, располагающуюся прямо над полярным тельцем. При этом в яйцеклетке осуществляется блок мейоза, снять который способен лишь сперматозоид, проникнувший сквозь оболочку.

Сперматозоиду, перед тем, как проникнуть в ооцит, следствием чего становится оплодотворение яйцеклетки, предстоит преодолеть ряд препятствий:

1) Сumulus — проникая вовнутрь него глубже, сперматозоид увеличивает свою скорость, демонстрируя фазу гиперактивности.

2) Zona pellucida — здесь сперматозоид связывается с рецептором.

После этого осуществляется акросомная реакция, при которой цитоплазматическая мембрана яйцеклетки и мембрана акросомы сперматозоида объединяются. Содержимое акросомы выбрасывается, связывается с zona pellucida и сперматозоид проникает через оболочку яйцеклетки, не теряя своей активности.

На том месте, которое располагается между оболочкой яйцеклетки и zona pellucida, сперматозоид присоединяется своими рецепторами к рецепторам, которые располагаются на оболочке яйцеклетки. Это способствует возникновению кортикальной реакции, которая становится причиной необратимых процессов zona pellucida, что делает её недоступной для проникновения других сперматозоидов.

День 1 – оценка оплодотворения:

Через 16-18 часов оценивается наличие признаков оплодотворения и качество зигот. Наличие в яйцеклетке 2-х пронуклеусов (PN) и 2 полярных тел (PB) указывает на нормальное развитие процесса оплодотворения. Пронуклеусы — это ядра половых клеток (сперматозоида и яйцеклетки) несущих по половине генетического материала от каждого родителя.

На этой стадии очень важно отбраковать аномально оплодотворившиеся эмбрионы: моноплоиды (1 пронуклеус), триплоиды (3) и полиплоиды(4 и более).

Зиготы с 3 ядрами (пронуклеусами) могут появлятся в результате:

1. Оплодотворения ооцита 2-мя сперматозоидами (чаще всего 2-мя сперматозоидами оплодотворяются яйцеклетки неудовлетворительного качества)

2. Оплодотворения ооцита аномальным сперматозоидом с двойным набором хромосом (все клетки человека имеют 46 хромосом-диплоидный набор. Зрелая яйцеклетка и сперматозоид имеют 23-гаплоидный набор. Образование сперматозоида с двойным набором хромосом (46) происходит при нарушениях процесса созревания гаметы)

3. Невыделения ооцитом 2-го полярного тельца (изначально незрелая яйцеклетка содержит 46 хромосом. Процесс созревания яйцеклетки — это хромосомные преобразования ведущие к формированию ооцита с гаплоидным набором хромосом. Гаплоидность достигается за счёт выделения 2-х полярных телец. Первое формируется у яйцеклетки готовой к оплодотворению, второе можно увидеть после оплодотворения, т.е. в норме видно 2 полярных тельца)

Полиплоиды появляются в результате оплодотворения яйцеклетки неудовлетворительного качества несколькими сперматозоидами или в результате сочетания вышеперечисленных факторов.

День 2- начало дробления

На 2-е сутки после слияние генетического материала сперматозоида и яйцеклетки происходит дробление — деление клетки на 2 и 4. Клетки дробящегося эмбриона называются бластомерами.

На этой стадии можно оценить качество эмбриона по степени фрагментации (%безъядерных фрагментов цитоплазмы), чем она больше — тем ниже считается потенциал этого эмбриона к имплантации и дальнейшему развитию. Помимо фрагментации оценивается форма и относительные размеры бластомеров (T.Hardarson, 2001). Наиболее общепринятая классификация дробящихся эмбрионов по качеству — A-B-C-D, где A — самый лучший, D — самый худший. Цифрами указывают количество бластомеров.

Оценка качества эмбрионов по степени фрагментации:Тип А — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А)

Тип В — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В)

Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С)

Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D)

Пример записи — (6В) — 6 клеточный эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20%

На этой же стадии оценивается равномерность бластомеров и количество ядер в них (в норме по 1).

День 3 – дробление

Еще через сутки эмбрион, как правило, уже состоит из 6-8 бластомеров. По литературным данным, «генетическая машина» эмбриона запускается на 4-х клеточной стадии, в конце вторых — начале третьих суток развития. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки: «опечатки»-мутации, «нет нужных страниц»-делеции или «лишние страницы» — дупликации, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).

День 4 — морула

На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) — начинается стадия морулы (от лат. morulae — тутовая ягода). К этой стадии in vivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость — начинается процесс кавитации.

Оценка морулы / компактизованного эмбриона:

(A) Grade 4: эмбрион полностью компактизован. Клеточные мембраны видны нечетко, но ядра различимы.

(B) Grade 3: компактизовано более 75% бластомеров. Эмбрион сохраняет сферичную форму и гладкую поверхность.

(C) Grade 2: частичная компактизация (около 50% бластомеров), аномальная морфология эмбриона.

(D) Grade 1: компактизация менее 50% бластомеров. Различимы фрагменты и некомпактизовавшиеся бластомеры.

Пример записи — (М3) — морула с компактизацией более 75% бластомеров.

День 5 — бластоциста

С того момента, как полость внутри морулы достигает 50% ее объема, эмбрион называется бластоцистой.

В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х до середины 6-х суток развития, чаще это происходит на 5-е сутки. Бластоциста состоит из двух популяций клеток — трофобласт (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотный комок клеток). Трофобласт отвечает за имплантацию — внедрение эмбриона в маточный эпителий (эндометрий). Клетки трофобласта дадут в дальнейшем начало всем внезародышевым оболочкам развивающегося плода, а из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. Чем больше полость бластоцисты и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт — тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, истончившаяся за счет растяжения блестящая оболочка (ZP) разрывается и начинается процесс хэтчинга (выклева) эмбриона из блестящей оболочки. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться (прикрепиться) в эндометрий матки. Имплантация происходит, как правило, на 6-7 день развития эмбриона.

Классификация эмбрионов на стадии бластоцисты. 

1 степень — ранняя бластоциста, полость бластоцисты меньше половины объема эмбриона.

2 степень — полость бластоцисты больше половины объема эмбриона.

3 степень — полная бластоциста. Полость полностью занимает объем эмбриона.

4 степень — расширенная бластоциста. Полость бластоцисты становится больше и начинает истончаться ZP.

5 степень — трофэктодерма ничинает проникать через ZP.

6 степень — вылупившаяся бластоциста, покинувшая ZP.

Внутриклеточная масса (ВКМ):

А — плотно упакованная с большим количеством клеток.

В — более свободная группировка среднего количества клеток.

С — незначительное количество клеток

Трофэктодермальный слой:

А — много клеток, формирующих трофэктодерму.

В — немного клеток.

С — незначительное количество больших клеток.

Пример записи — (4АА) — расширенная бластоциста, вкм — плотно упакованная с большим количеством клеток, много клеток формирующих трофэктодерму.